Plasmide Double Nickase (h) caspase-2: sc-401079-NIC

CASP2 code la caspase‑2, une protéase à cystéine initiatrice qui intègre les signaux de stress cellulaire pour réguler l’apoptose, les points de contrôle du cycle cellulaire et la stabilité génomique. La caspase‑2 participe aux signaux de mort intrinsèques et aux voies sensibles au stress, notamment aux réponses associées à p53 face aux dommages de l’ADN et au stress oxydant, et peut influencer la perméabilisation de la membrane externe mitochondriale via le clivage d’effecteurs en aval. En reliant la détection des dommages à la mort cellulaire programmée et au contrôle mitotique, CASP2 contribue au maintien de l’homéostasie tissulaire et a été étudié dans des contextes de tumorigenèse, de neurodégénérescence et de stress inflammatoire. Une activité de CASP2 dérégulée a été associée à une susceptibilité modifiée à l’apoptose et à une élimination insuffisante des cellules endommagées, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques des décisions de destinée cellulaire.

caspase-2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CASP2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CASP2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CASP2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CASP2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.