Plasmide CRISPR/Cas9 KO caspase-14 (h): sc-402687

Présentation

CASP14 code la caspase-14, un membre atypique de la famille des caspases qui intervient principalement dans la différenciation épidermique plutôt que dans l’apoptose. Elle est fortement exprimée dans les kératinocytes et contribue à la cornification et à la formation de la barrière cutanée en soutenant les programmes de différenciation terminale ainsi que des événements de maturation protéolytique au sein de la couche cornée. Par ces fonctions, la caspase-14 aide à réguler l’hydratation et l’intégrité de la barrière, reliant l’activité de CASP14 aux voies de contrôle de la kératinisation et de l’homéostasie épidermique. Des altérations de l’expression ou de la maturation de CASP14 ont été associées à un dysfonctionnement de la barrière et à des phénotypes cutanés inflammatoires, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques de la biologie des maladies dermatologiques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO caspase-14 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CASP14 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CASP14, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CASP14 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine caspase-14.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CASP14 pour l'étude de la signalisation de caspase-14, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CASP14 essentiels à la fonction de caspase-14
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CASP14 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le caspase-14 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le caspase-14 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CASP14. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le caspase-14 plasmide HDR (h) et le caspase-14 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CASP14 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CASP14 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.