Plasmide CRISPR d'Activation (h) caspase-14: sc-402687-ACT

Le gène humain **CASP14** code la caspase‑14, une caspase atypique principalement associée à la différenciation épidermique plutôt qu’à la signalisation apoptotique canonique. La caspase‑14 favorise la maturation terminale des kératinocytes et la formation de la couche cornée en contribuant aux processus de cornification et à l’homéostasie de la barrière cutanée, notamment via des événements protéolytiques liés au traitement de la filaggrine et à la production du facteur naturel d’hydratation (NMF). Des altérations de l’expression ou de l’activité de **CASP14** ont été associées à une fonction de barrière cutanée compromise et à des phénotypes cutanés inflammatoires, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de la kératinisation, de l’intégrité de la barrière et des réponses au stress dans les tissus épithéliaux. Dans le contexte plus large de la famille des caspases, **CASP14** constitue un point d’entrée utile pour disséquer des fonctions protéasiques non apoptotiques impliquées dans des voies liées à la différenciation.

caspase-14 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CASP14 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

caspase-14 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CASP14 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CASP14, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de caspase-14. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CASP14 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de caspase-14 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie caspase-14 dans les cellules tumorales présentant une expression de CASP14 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.