Plasmide CRISPR d'Activation (h) casein kinase IIβ: sc-401684-ACT

CSNK2B code la sous-unité régulatrice bêta de la caséine kinase II (CK2), un complexe kinase sérine/thréonine constitutivement actif qui module la sélectivité des substrats, la stabilité enzymatique et la localisation subcellulaire des sous-unités catalytiques. La signalisation de CK2 influence des processus fondamentaux, notamment la progression du cycle cellulaire, la réponse aux dommages de l’ADN, l’apoptose et le contrôle transcriptionnel, avec une intégration étendue dans des voies telles que Wnt/β-caténine, NF-κB et PI3K/AKT. Par la phosphorylation de nombreuses cibles nucléaires et cytoplasmiques, CSNK2B contribue à la régulation de la chromatine, au traitement des ARN et à la protéostasie. Une activité de CK2 dérégulée et une expression altérée de CSNK2B ont été associées à une prolifération aberrante et à une signalisation de réponse au stress en oncologie, ainsi qu’à des phénotypes neurodéveloppementaux, ce qui soutient sa pertinence dans des modèles mécanistiques de maladie.

casein kinase IIβ Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CSNK2B sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

casein kinase IIβ Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CSNK2B dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CSNK2B, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de casein kinase IIβ. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CSNK2B natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de casein kinase IIβ au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie casein kinase IIβ dans les cellules tumorales présentant une expression de CSNK2B silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.