Plasmide CRISPR/Cas9 KO casein kinase IIα′ (h): sc-401148

Présentation

CSNK2A2 code la sous-unité catalytique alpha′ de la caséine kinase II (CK2) humaine, une kinase sérine/thréonine constitutivement active qui forme l’holoenzyme CK2 avec des sous-unités bêta régulatrices et phosphoryle un large éventail de substrats nucléaires et cytoplasmiques. La signalisation de CK2 s’articule avec des processus clés, notamment la progression du cycle cellulaire, les réponses aux dommages de l’ADN, la régulation de la chromatine et l’apoptose, et elle module des voies majeures telles que NF-κB, Wnt/β-caténine, PI3K/AKT et MAPK par phosphorylation de ses substrats. En façonnant le contrôle, dépendant de la phosphorylation, des facteurs de transcription et des protéines de maturation de l’ARN, CSNK2A2 influence la prolifération et l’adaptation au stress. Une activité de CK2 dérégulée et une expression altérée de CSNK2A2 ont été associées à la biologie tumorale, à la signalisation inflammatoire et à d’autres pathologies liées à la phosphorylation, ce qui étaye son intérêt en tant que nœud mécanistique en recherche biomédicale.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO casein kinase IIα′ (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CSNK2A2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CSNK2A2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CSNK2A2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine casein kinase IIα′.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CSNK2A2 pour l'étude de la signalisation de casein kinase IIα′, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CSNK2A2 essentiels à la fonction de casein kinase IIα′
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CSNK2A2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le casein kinase IIα′ plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le casein kinase IIα′ plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CSNK2A2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le casein kinase IIα′ plasmide HDR (h) et le casein kinase IIα′ (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CSNK2A2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CSNK2A2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.