Plasmide CRISPR d'Activation (h) casein kinase IIα′: sc-401148-ACT

CSNK2A2 code la sous-unité catalytique alpha′ de la caséine kinase II, une sérine/thréonine kinase constitutivement active qui s’associe à des sous-unités régulatrices bêta pour former l’holoenzyme CK2. CK2 phosphoryle un large éventail de substrats impliqués dans l’organisation de la chromatine, la transcription et le traitement de l’ARN, la progression du cycle cellulaire et les réponses aux dommages de l’ADN, en intégrant des signaux à travers des voies telles que Wnt/β-caténine, NF-κB, PI3K/AKT et MAPK. Par ces fonctions à l’échelle des réseaux, CSNK2A2 contribue à la régulation de la prolifération, de l’adaptation au stress et de l’apoptose, ce qui en fait une cible pertinente pour les études mécanistiques de la signalisation oncogénique, des processus neurodéveloppementaux et de la modulation des voies inflammatoires. Une activité CK2 dérégulée et une expression altérée de CSNK2A2 ont été associées à la biologie tumorale, à des programmes de phosphorylation aberrants et à une homéostasie cellulaire perturbée dans de multiples contextes pathologiques.

casein kinase IIα′ Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CSNK2A2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

casein kinase IIα′ Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CSNK2A2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CSNK2A2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de casein kinase IIα′. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CSNK2A2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de casein kinase IIα′ au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie casein kinase IIα′ dans les cellules tumorales présentant une expression de CSNK2A2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.