casein kinase IIα Plasmide Double Nickase (h): sc-418515-NIC

CSNK2A1 codifica la subunità catalitica alfa della caseina chinasi II (CK2α), una chinasi serina/treonina costitutivamente attiva che fosforila numerosi substrati coinvolti nella trasduzione del segnale, nel controllo trascrizionale e nel turnover proteico. CK2α opera in vie che regolano la progressione del ciclo cellulare, le risposte al danno al DNA e la segnalazione da stress, e modula processi associati alla cromatina attraverso la fosforilazione di fattori nucleari. Una deregolazione dell’attività di CSNK2A1/CK2 è stata collegata ad alterazioni della segnalazione di crescita e a reti di fosforilazione aberranti osservate in diversi contesti patologici, inclusi il cancro e i disturbi del neurosviluppo. In quanto nodo centrale della fosforegolazione, CK2α è frequentemente studiata per mappare circuiti dipendenti dalle chinasi e definire dipendenze specifiche di contesto nelle cellule umane.

casein kinase IIα Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CSNK2A1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CSNK2A1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CSNK2A1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CSNK2A1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.