Plásmido Doble Nickase (h) casein kinase IIα: sc-418515-NIC

CSNK2A1 codifica la subunidad alfa catalítica de la caseína quinasa II (CK2α), una quinasa de serina/treonina constitutivamente activa que fosforila diversos sustratos implicados en la transducción de señales, el control transcripcional y el recambio proteico. CK2α participa en vías que regulan la progresión del ciclo celular, las respuestas al daño del ADN y la señalización de estrés, y modula procesos asociados a la cromatina mediante la fosforilación de factores nucleares. La desregulación de la actividad de CSNK2A1/CK2 se ha asociado con alteraciones en la señalización de crecimiento y con redes de fosforilación aberrantes observadas en múltiples contextos patológicos, incluidos el cáncer y los trastornos del neurodesarrollo. Como nodo central en la fosforregulación, CK2α se estudia con frecuencia para cartografiar circuitos dependientes de quinasas y definir dependencias específicas del contexto en células humanas.

casein kinase IIα El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CSNK2A1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CSNK2A1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CSNK2A1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CSNK2A1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.