Plasmide CRISPR d'Activation (h) casein kinase IIα: sc-418515-ACT

CSNK2A1 code la sous-unité alpha catalytique de la caséine kinase II (CK2α), une kinase sérine/thréonine constitutivement active qui phosphoryle un large éventail de substrats nucléaires et cytoplasmiques. CK2α intègre des signaux au sein de voies clés contrôlant la progression du cycle cellulaire, les réponses aux dommages de l’ADN, la dynamique de la chromatine, la transcription et la traduction, avec des rôles documentés dans les réseaux de signalisation Wnt/β-caténine, NF-κB, PI3K–AKT et MAPK. Par la régulation de l’apoptose, de la protéostasie et de l’adaptation au stress, CK2α contribue à l’homéostasie cellulaire dans de multiples contextes tissulaires. Des altérations de l’activité ou de l’expression de CSNK2A1 ont été associées à une prolifération dérégulée et à des phénotypes développementaux, ce qui étaye son intérêt comme nœud mécanistique dans la recherche sur les voies de signalisation impliquées dans les maladies.

casein kinase IIα Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CSNK2A1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

casein kinase IIα Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CSNK2A1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CSNK2A1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de casein kinase IIα. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CSNK2A1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de casein kinase IIα au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie casein kinase IIα dans les cellules tumorales présentant une expression de CSNK2A1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.