Plasmide CRISPR/Cas9 KO casein kinase Iγ3 (h): sc-406678

Présentation

CSNK1G3 code la caséine kinase I gamma 3 (CK1γ3), une protéine kinase sérine/thréonine de la famille CK1 associée aux membranes, qui phosphoryle divers substrats afin de moduler la transduction du signal, le renouvellement des protéines et le trafic subcellulaire. Les isoformes de CK1 interagissent fréquemment avec des voies telles que la signalisation Wnt/β-caténine, le contrôle circadien et du cycle cellulaire, ainsi qu’avec des événements de phosphorylation proximaux aux récepteurs qui influencent l’endocytose et l’organisation du cytosquelette. Par ces fonctions, l’activité de CSNK1G3 peut affecter des points de contrôle dépendants de la phosphorylation, la dégradation médiée par l’ubiquitine et la dynamique de la signalisation en réponse aux stimuli. Une signalisation kinase dérégulée et des réseaux de phosphorylation altérés sont souvent associés à des phénotypes prolifératifs et neurobiologiques, ce qui motive l’étude de CSNK1G3 dans des modèles cellulaires pertinents pour les maladies, sans présumer de retombées cliniques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO casein kinase Iγ3 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CSNK1G3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CSNK1G3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CSNK1G3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine casein kinase Iγ3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CSNK1G3 pour l'étude de la signalisation de casein kinase Iγ3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CSNK1G3 essentiels à la fonction de casein kinase Iγ3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CSNK1G3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le casein kinase Iγ3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le casein kinase Iγ3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CSNK1G3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le casein kinase Iγ3 plasmide HDR (h) et le casein kinase Iγ3 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CSNK1G3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CSNK1G3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.