Plásmido CRISPR de Activación (h) casein kinase Iγ1: sc-404681-ACT

CSNK1G1 codifica la caseína quinasa Iγ1, una quinasa de serina/treonina asociada a membrana de la familia CK1 que modula la señalización dependiente de la fosforilación y el recambio de proteínas. Las isoformas de CK1 regulan múltiples procesos, como el tráfico de receptores, el ritmo circadiano y la señalización en respuesta al estrés, y se conectan con vías como Wnt/β-catenina, Hedgehog y las respuestas al daño del ADN mediante la fosforilación de componentes clave de dichas vías. Al moldear la dinámica de la fosfoseñalización en membranas y dentro de complejos citosólicos, CSNK1G1 influye en el control del ciclo celular, la polaridad y los bucles de retroalimentación homeostática. La actividad desregulada de CK1 se ha relacionado con señales proliferativas alteradas y otros fenotipos relevantes para enfermedades, lo que hace que CSNK1G1 sea útil para estudios mecanísticos sobre el reconfiguramiento de vías impulsado por quinasas.

casein kinase Iγ1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CSNK1G1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

casein kinase Iγ1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CSNK1G1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CSNK1G1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de casein kinase Iγ1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CSNK1G1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de casein kinase Iγ1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía casein kinase Iγ1 en células tumorales con expresión de CSNK1G1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.