Plasmide Double Nickase (h) casein kinase Iδ: sc-401839-NIC

CSNK1D code la caséine kinase Iδ, une sérine/thréonine kinase qui phosphoryle une grande diversité de substrats afin de coordonner la synchronisation de l’horloge circadienne, le trafic vésiculaire et l’organisation du cytosquelette. Elle contribue à l’intégration des signaux dans les voies Wnt/β-caténine, Hedgehog et celles répondant aux dommages de l’ADN, en influençant la stabilité des protéines et leur localisation subcellulaire via une phosphorylation régulée. Une activité dérégulée de CSNK1D a été associée à des phénotypes circadiens altérés et à des programmes de signalisation aberrants pertinents pour des processus oncogéniques et neurobiologiques, ce qui en fait un nœud utile pour l’interrogation des voies. Les études exploitent couramment la perturbation de CSNK1D pour disséquer le contrôle, dépendant des kinases, des rythmes transcriptionnels, de la progression mitotique et du turnover protéique régulé par phosphorylation.

casein kinase Iδ Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CSNK1D dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CSNK1D. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CSNK1D. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CSNK1D.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.