Plasmide Double Nickase (h) CAS: sc-417159-NIC

CSE1L code la protéine de susceptibilité cellulaire à l’apoptose (CAS), un composant de la voie de la GTPase Ran qui agit comme exportine pour l’importine-α, contribuant au recyclage des récepteurs de transport nucléaire et au maintien de la fidélité du trafic nucléocytoplasmique. Par ce rôle, CAS influence la progression du cycle cellulaire, le contrôle de la mitose et des programmes de réponse au stress liés à la susceptibilité à l’apoptose et au maintien du génome. Une expression altérée de CSE1L a été rapportée dans de nombreux types de tumeurs et est fréquemment étudiée en lien avec la prolifération, l’invasion et le potentiel métastatique, ce qui concorde avec sa position centrale dans une régulation de la transcription et de la signalisation dépendante du transport. En recherche biomédicale, CSE1L est utilisé comme nœud d’étude pour analyser comment la dynamique d’import/export nucléaire façonne des phénotypes oncogéniques et les décisions de destinée cellulaire.

CAS Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CSE1L dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CSE1L. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CSE1L. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CSE1L.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.