Plasmide Double Nickase (h) CARM1: sc-404087-NIC

CARM1 (PRMT4) est une méthyltransférase des arginines protéiques qui catalyse la diméthylation asymétrique de l’histone H3 ainsi que de substrats non histoniques, coordonnant le contrôle épigénétique de la transcription. Par la méthylation de coactivateurs transcriptionnels et de facteurs associés à la chromatine, CARM1 intègre des signaux dans des programmes régissant la progression du cycle cellulaire, la spécification des lignages et la maturation de l’ARN. Elle intervient dans des voies de régulation transcriptionnelle liées à la signalisation des récepteurs nucléaires, à la coactivation du récepteur des œstrogènes et à des complexes de remodelage de la chromatine qui modulent l’activité des enhancers et des promoteurs. Une expression ou une activité dérégulée de CARM1 a été associée à des états transcriptionnels oncogéniques et à des programmes de différenciation altérés, ce qui en fait une cible majeure pour des études mécanistiques en biologie du cancer et dans les systèmes du développement.

CARM1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CARM1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CARM1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CARM1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CARM1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.