Plasmide CRISPR/Cas9 KO CARM1 (m): sc-425576

Présentation

Carm1 code la méthyltransférase d’arginine associée aux coactivateurs 1 (CARM1/PRMT4), une méthyltransférase d’arginine visant des protéines histones et non histones, qui régule l’accessibilité de la chromatine et les programmes transcriptionnels. CARM1 méthyle des substrats tels que l’histone H3 (p. ex., H3R17/H3R26) ainsi que des régulateurs transcriptionnels, coordonnant l’expression génique dépendante de l’ARN polymérase II, l’épissage alternatif et la transcription en réponse aux signaux. Dans les cellules murines, Carm1 influence des voies liées à la signalisation des récepteurs nucléaires et des facteurs de croissance, aux décisions de destinée cellulaire et au contrôle épigénétique de la différenciation et de la prolifération. Une activité de CARM1 dérégulée est largement étudiée dans des contextes de régulation transcriptionnelle aberrante, d’anomalies du développement et de signalisation oncogénique, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques des réseaux épigénétiques et transcriptionnels.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CARM1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Carm1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Carm1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Carm1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CARM1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Carm1 pour l'étude de la signalisation de CARM1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Carm1 essentiels à la fonction de CARM1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Carm1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CARM1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le CARM1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Carm1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CARM1 plasmide HDR (m) et le CARM1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Carm1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Carm1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.