Plasmide CRISPR d'Activation (h) CARM1: sc-404087-ACT

CARM1 (coactivateur associé à la méthyltransférase des arginines 1 ; PRMT4) est une méthyltransférase nucléaire des arginines qui catalyse la diméthylation asymétrique de l’histone H3 (p. ex., H3R17 et H3R26) ainsi que de nombreux substrats non histoniques. Par le remodelage épigénétique et la méthylation de ses substrats, CARM1 régule des programmes de coactivation transcriptionnelle liés à la signalisation des récepteurs hormonaux, au traitement de l’ARN et à la dynamique de la chromatine. Son activité interagit avec des voies contrôlant la progression du cycle cellulaire, la différenciation et l’expression de gènes répondant au stress, via la modulation de complexes de facteurs de transcription et de coactivateurs. Une expression ou une fonction dérégulée de CARM1 a été associée à des réseaux transcriptionnels altérés en biologie du cancer, ainsi qu’à des effets plus larges sur des phénotypes développementaux et métaboliques, ce qui en fait un nœud pertinent pour des études mécanistiques de la régulation génique.

CARM1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CARM1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CARM1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CARM1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CARM1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CARM1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CARM1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CARM1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CARM1 dans les cellules tumorales présentant une expression de CARM1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.