Plasmide CRISPR d'Activation (h) CARD 9: sc-402214-ACT

La protéine 9 contenant un domaine de recrutement des caspases (CARD9) est une protéine adaptatrice exprimée principalement dans les lignées myéloïdes, qui couple la signalisation des récepteurs aux lectines de type C aux réponses immunitaires innées en aval. Lorsqu’elle détecte des ligands fongiques et d’autres ligands microbiens, CARD9 intègre les signaux de récepteurs tels que Dectin-1 et Dectin-2 afin de favoriser l’activation des voies NF-κB et MAPK, la production de cytokines associées à l’inflammasome et l’orientation de programmes inflammatoires polarisés vers Th17. Les perturbations génétiques et fonctionnelles de CARD9 ont été associées à des interactions hôte–microbiote altérées et à une inflammation dérégulée, avec des liens allant d’une susceptibilité accrue aux infections fongiques invasives à des phénotypes inflammatoires à médiation immunitaire. En tant que plateforme de signalisation à l’interface entre la reconnaissance des motifs et le contrôle transcriptionnel, CARD9 est largement étudiée dans les voies qui régissent l’activation myéloïde, les réseaux de cytokines et l’immunité des barrières.

CARD 9 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CARD9 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CARD 9 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CARD9 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CARD9, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CARD 9. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CARD9 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CARD 9 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CARD 9 dans les cellules tumorales présentant une expression de CARD9 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.