Plasmide Double Nickase (h) CARD 12: sc-418306-NIC

Le gène humain **NLRC4** (également appelé **CARD12**) code un récepteur cytosolique de type NOD qui amorce l’assemblage de l’inflammasome **NLRC4** en réponse à des ligands bactériens détectés via les protéines **NAIP**. La formation de l’inflammasome favorise l’activation de la caspase‑1, la maturation d’**IL‑1β** et d’**IL‑18**, ainsi que l’induction d’une mort cellulaire pyroptotique, reliant la détection immunitaire innée à la signalisation inflammatoire. **NLRC4** agit à l’interface des voies de reconnaissance des motifs et de maturation des cytokines, qui façonnent l’activation myéloïde, la défense épithéliale et l’homéostasie tissulaire. Une activité **NLRC4** dérégulée et des variants affectant le contrôle de l’inflammasome ont été associés à des phénotypes auto‑inflammatoires et à des lésions tissulaires inflammatoires, ce qui en fait un nœud utile pour des études mécanistiques de la biologie des inflammasomes.

CARD 12 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus NLRC4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de NLRC4. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de NLRC4. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de NLRC4.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.