Plásmido CRISPR de Activación (h) Carbonyl reductase 1: sc-402755-ACT

El CBR1 humano codifica la carbonil reductasa 1, una oxidorreductasa citosólica dependiente de NADPH que convierte una amplia gama de aldehídos y cetonas reactivos en alcoholes menos reactivos. Al procesar carbonilos derivados de la peroxidación lipídica y otros electrófilos, CBR1 contribuye a la homeostasis redox celular, a las respuestas al estrés oxidativo y al metabolismo de compuestos carbonílicos endógenos y xenobióticos. La alteración de la actividad de CBR1 se ha relacionado con variaciones en la capacidad de desintoxicación de carbonilos y con desequilibrios redox observados en biología del cáncer, inflamación y disfunción metabólica, lo que la hace relevante para estudios a nivel de vías sobre daño oxidativo y señalización adaptativa al estrés. Su posición enzimática se conecta con redes más amplias de desintoxicación de aldehídos y de utilización de NADPH que influyen en la proteostasis y la supervivencia celular bajo estrés.

Carbonyl reductase 1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CBR1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Carbonyl reductase 1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CBR1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CBR1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Carbonyl reductase 1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CBR1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Carbonyl reductase 1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Carbonyl reductase 1 en células tumorales con expresión de CBR1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.