Plasmide Double Nickase (h) CAP1: sc-405060-NIC

La CAP1 humaine (cyclase-associated actin cytoskeleton regulatory protein 1) est une protéine se liant à l’actine qui coordonne le renouvellement des filaments d’actine et le remodelage du cytosquelette via des interactions avec la cofiline et la profilin, contribuant au maintien de la forme cellulaire, à la motilité et au trafic endocytique. CAP1 participe à la régulation de la dynamique de l’actine en aval de réseaux de signalisation qui influencent l’adhésion et la migration, reliant l’état du cytosquelette à des programmes plus larges tels que la prolifération et les réponses au stress. Des altérations de l’expression ou de l’activité de CAP1 ont été associées à des modifications de l’invasion cellulaire, à des phénotypes liés à la transition épithélio-mésenchymateuse et à la progression tumorale dans plusieurs contextes cancéreux. Ces fonctions font de CAP1 un nœud utile pour étudier les processus dépendants de l’actine, le trafic membranaire et le dialogue signalisation–cytosquelette dans les cellules humaines.

CAP1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CAP1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CAP1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CAP1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CAP1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.