Plasmide CRISPR d'Activation (h) CaMKII beta: sc-402744-ACT

CAMK2B code la sous-unité bêta de la CaMKII, une kinase sérine/thréonine dépendante du Ca2+/calmoduline qui convertit les transitoires de calcium intracellulaire en programmes de phosphorylation contrôlant la signalisation synaptique et la plasticité structurelle. La CaMKII bêta contribue à l’assemblage de l’holoenzyme, au ciblage subcellulaire et aux interactions avec le cytosquelette d’actine, qui façonnent le remodelage des épines dendritiques et la neurotransmission dépendante de l’activité. Dans les neurones, CAMK2B participe à des voies liées à la signalisation des récepteurs NMDA, à la potentialisation à long terme/la dépression à long terme, ainsi qu’à la régulation génique dépendante du calcium. Une signalisation CaMKII dérégulée et des modifications des réseaux associés à CAMK2B ont été impliquées dans des phénotypes neurodéveloppementaux et neuropsychiatriques, ce qui en fait un nœud mécanistique pertinent pour l’étude du fonctionnement et de la plasticité des circuits neuronaux.

CaMKII beta Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CAMK2B sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CaMKII beta Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CAMK2B dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CAMK2B, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CaMKII beta. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CAMK2B natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CaMKII beta au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CaMKII beta dans les cellules tumorales présentant une expression de CAMK2B silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.