Plasmide Double Nickase (h) CAMK2A/CaMKII alpha: sc-400228-NIC

CAMK2A code la sous-unité alpha de la protéine kinase II dépendante du Ca2+/calmoduline (CaMKIIα), une kinase sérine/thréonine qui traduit les transitoires intracellulaires de Ca2+ en événements de phosphorylation essentiels à la transmission synaptique et à la plasticité dépendante de l'activité. CaMKIIα subit une autophosphorylation qui permet de maintenir l'activité kinase et module la signalisation glutamatergique via la phosphorylation de canaux ioniques, de récepteurs et de protéines d'échafaudage, intégrant la signalisation calcique au remodelage du cytosquelette et aux programmes d'expression génique. Cette kinase constitue un nœud central des voies de signalisation neuronales influençant l'apprentissage et la mémoire, et une activité altérée de CAMK2A a été associée à des phénotypes neurodéveloppementaux et neuropsychiatriques, ainsi qu'à des mécanismes liés aux crises dans des modèles expérimentaux. En conséquence, CAMK2A est largement utilisé comme outil moléculaire pour étudier la régulation des synapses excitatrices, la dynamique des signalisations dépendantes du calcium et les réseaux de phosphorylation en aval dans des systèmes neuronaux humains.

CAMK2A/CaMKII alpha Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CAMK2A dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CAMK2A. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CAMK2A. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CAMK2A.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.