Plasmide CRISPR/Cas9 KO calsyntenin-1 (m): sc-425768

Présentation

Clstn1 code la calsynténine‑1, une protéine membranaire de type I enrichie dans les neurones, qui agit comme adaptateur de cargaison en reliant des vésicules aux moteurs de kinésine et en coordonnant le transport antérograde dans les axones et les dendrites. Grâce à ses interactions avec la protéine précurseur de l’amyloïde (APP), des composants synaptiques et la machinerie de trafic endosomal, la calsynténine‑1 contribue à la formation des synapses, au trafic des récepteurs et à une connectivité neuronale dépendante de l’activité. La perturbation du transport dépendant de CLSTN1 et de l’homéostasie synaptique a été étudiée dans le cadre de mécanismes de maladies neurodéveloppementales et neurodégénératives, notamment des voies impliquées dans le traitement de l’APP associé à la maladie d’Alzheimer. Dans les modèles murins, Clstn1 est fréquemment étudié afin de déterminer comment le transport intracellulaire à longue distance façonne l’assemblage des circuits, la plasticité synaptique et la vulnérabilité neuronale.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO calsyntenin-1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Clstn1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Clstn1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Clstn1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine calsyntenin-1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Clstn1 pour l'étude de la signalisation de calsyntenin-1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Clstn1 essentiels à la fonction de calsyntenin-1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Clstn1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le calsyntenin-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le calsyntenin-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Clstn1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le calsyntenin-1 plasmide HDR (m) et le calsyntenin-1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Clstn1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Clstn1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.