Plasmide Double Nickase (m) calsequestrin 2: sc-419472-NIC

Le gène murin *Casq2* code la calséquestrine 2, une protéine de liaison au Ca²⁺ à forte capacité, localisée dans la lumière du réticulum sarcoplasmique des cardiomyocytes, où elle tamponne et organise les réserves de Ca²⁺. En interagissant avec les complexes du récepteur à la ryanodine et des protéines jonctionnelles associées, la calséquestrine 2 contribue à façonner le couplage excitation–contraction, la libération de Ca²⁺ induite par le Ca²⁺ et la dynamique de rechargement du Ca²⁺ du RS. L’altération de la fonction de *CASQ2* est associée à une régulation intracellulaire anormale du Ca²⁺, à des post‑dépolarisations tardives et à des phénotypes arythmogènes déclenchés par le stress, ce qui en fait un nœud clé des voies impliquées dans la stabilité du rythme cardiaque. *Casq2* est donc largement étudié dans les mécanismes d’homéostasie du Ca²⁺ du RS, la signalisation des cardiomyocytes et les modèles génétiques de susceptibilité héréditaire aux arythmies.

calsequestrin 2 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Casq2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Casq2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Casq2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Casq2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.