Plasmide CRISPR d'Activation (h) calsequestrin 2: sc-402912-ACT

CASQ2 code la calséquestrine 2, la principale protéine de liaison au Ca2+ dans la lumière du réticulum sarcoplasmique des cardiomyocytes. Elle tamponne le calcium intraluminal et contribue à façonner le couplage excitation–contraction. En organisant le stockage et la libération de Ca2+ à proximité des complexes du récepteur à la ryanodine, la calséquestrine 2 influence la libération de calcium induite par le calcium, le rechargement du réticulum sarcoplasmique (RS) et la signalisation de l’homéostasie calcique. Une perturbation de l’expression ou de la fonction de CASQ2 modifie la charge en Ca2+ du RS et la dynamique de sa libération, contribuant à une gestion anormale du calcium et à des phénotypes cellulaires arythmogènes. Ces propriétés font de CASQ2 un nœud clé pour l’étude du cycle calcique cardiaque, des réponses au stress et des mécanismes reliant la dysrégulation du calcium du RS aux troubles du rythme héréditaires.

calsequestrin 2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CASQ2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

calsequestrin 2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CASQ2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CASQ2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de calsequestrin 2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CASQ2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de calsequestrin 2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie calsequestrin 2 dans les cellules tumorales présentant une expression de CASQ2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.