Plasmide CRISPR d'Activation (h) calsequestrin 1: sc-403375-ACT

CASQ1 code la calséquestrine 1, une protéine à forte capacité de liaison au Ca2+ localisée dans la lumière du réticulum sarcoplasmique des fibres musculaires squelettiques à contraction rapide. En tamponnant et en relarguant le Ca2+ luminal, la calséquestrine 1 soutient le couplage excitation–contraction et contribue à façonner la dynamique de libération du Ca2+ médiée par le récepteur à la ryanodine, influençant l’homéostasie du calcium, la contractilité musculaire et la stabilité des réserves de Ca2+ du RS. Une altération de la fonction de CASQ1 a été associée à des modifications de la signalisation intracellulaire du Ca2+ et des réponses au stress dans le muscle squelettique, offrant un point d’entrée mécanistique pour étudier les voies dépendantes du Ca2+, la protéostase et la physiologie des myofibres. En tant que régulateur central du tamponnage du Ca2+ dans le RS, CASQ1 est fréquemment étudié dans des modèles de dysfonction musculaire où une gestion anormale du Ca2+ contribue à la pathologie.

calsequestrin 1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CASQ1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

calsequestrin 1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CASQ1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CASQ1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de calsequestrin 1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CASQ1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de calsequestrin 1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie calsequestrin 1 dans les cellules tumorales présentant une expression de CASQ1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.