Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Calregulin Double Nickase Plasmid (h): sc-400775-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Calregulin Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Calregulin Double-Nickase-Plasmid (h) und Calregulin Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CALR abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Calregulin: sc-373863
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Calregulin Double Nickase Plasmid (h) | sc-400775-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Calregulin Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400775-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Humanes **CALR** kodiert **Calreticulin**, ein luminales Chaperon des endoplasmatischen Retikulums (ER) und ein hochkapazitives **Ca²⁺-bindendes Protein**, das die Faltung und Qualitätskontrolle von Glykoproteinen über den **Calnexin/Calreticulin-Zyklus** sowie den **ER-assoziierten Abbau (ERAD)** unterstützt. Calreticulin reguliert die intrazelluläre Calciumhomöostase und ist in die ER-Stress-Signalübertragung und die **unfolded protein response (UPR)** eingebunden; über Veränderungen in calciumabhängiger Signalgebung beeinflusst es Apoptose, Zelladhäsion und immunbezogene Prozesse. Eine fehlregulierte CALR-Aktivität wird mit veränderter Proteostase und Stressadaptation in der Krebsbiologie in Verbindung gebracht sowie mit **CALR-Mutationen** bei myeloproliferativen Neoplasien, die nachgeschaltete Signalnetzwerke stören. Diese Eigenschaften machen CALR zu einem häufig untersuchten Knotenpunkt, der ER-Proteostase, Calcium-Signalgebung und zelluläre Stressantworten verbindet.
Calregulin Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CALR-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CALR abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CALR-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CALR-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.