Calponin 1 Plasmide Double Nickase (h): sc-401397-NIC

CNN1 codifica la calponina 1, una proteina che lega actina e calmodulina, arricchita nel muscolo liscio differenziato, dove stabilizza il citoscheletro contrattile e modula l’attività ATPasica dell’actomiosina. La calponina 1 contribuisce all’organizzazione dei filamenti di actina, alla dinamica delle adesioni focali e alla regolazione calcio-dipendente del tono del muscolo liscio, collegando il rimodellamento del citoscheletro con la segnalazione contrattile. L’alterazione dell’espressione di CNN1 è spesso utilizzata come indicatore dello switching fenotipico delle cellule muscolari lisce durante il rimodellamento vascolare e nei processi associati alla fibrosi. Queste proprietà rendono CNN1 un nodo molecolare utile per studiare la regolazione del citoscheletro, la motilità cellulare e la differenziazione del muscolo liscio in contesti cardiovascolari e di rimodellamento tissutale.

Calponin 1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CNN1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CNN1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CNN1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CNN1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.