Calponin 1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401397-ACT

CNN1は、平滑筋や筋線維芽細胞様状態で豊富に発現するアクチン結合性の調節タンパク質であるカルポニン1をコードし、アクトミオシン収縮性を調節する。フィラメント状アクチンに結合し、ミオシンATPアーゼ活性に影響を与えることで、カルポニン1はRhoA/ROCKシグナル伝達とアクチンストレスファイバー動態を統合する経路のもとで、細胞骨格の構築、細胞接着、ならびに収縮力の発生に寄与する。CNN1の発現変化は、平滑筋分化および表現型スイッチングのマーカーとして用いられており、これらの過程は血管リモデリングや線維増殖性反応と関連する。カルポニン1に関連する細胞骨格プログラムの破綻は、異常な組織硬度や細胞運動性といった状況で報告されており、細胞可塑性やメカノバイオロジーの研究における指標としての有用性を裏づけている。

Calponin 1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CNN1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Calponin 1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CNN1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCNN1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Calponin 1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCNN1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCalponin 1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCNN1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCalponin 1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。