Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Calpain reg Double Nickase Plasmid (h): sc-403478-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Calpain reg Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Calpain reg Double-Nickase-Plasmid (h) und Calpain reg Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CAPNS1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Calpain reg: sc-32325
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Calpain reg Double Nickase Plasmid (h) | sc-403478-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Calpain reg Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403478-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CAPNS1 kodiert die regulatorische kleine Untereinheit, die für Stabilität und Aktivität der ubiquitären Cysteinprotease-Komplexe Calpain‑1 und Calpain‑2 erforderlich ist. Die Calpain-Signalgebung vermittelt eine begrenzte Proteolyse von Zytoskelett- und Signalproteinen und steuert dadurch den Umsatz fokaler Adhäsionen, Membrandynamik sowie calciumabhängige Umbauprozesse während Zellmigration, Zellzyklusprogression und Apoptose. Durch die Spaltung von Substraten, die an NF‑κB-, MAPK- und integrinassoziierten Signalwegen beteiligt sind, kann CAPNS1 Entzündungssignale und Stressantworten beeinflussen. Eine fehlregulierte Calpain-Aktivität wurde mit invasivem Verhalten von Krebszellen, Neurodegeneration sowie kardiovaskulärer und metabolischer Pathophysiologie in Verbindung gebracht, wodurch CAPNS1 einen nützlichen Ansatzpunkt für mechanistische Studien der Proteostase und calciumgetriebener Signalnetzwerke darstellt.
Calpain reg Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CAPNS1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CAPNS1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CAPNS1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CAPNS1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.