Plásmido CRISPR de Activación (h) Calpain 15: sc-411016-ACT

El gen humano **CAPN15** codifica la calpaína 15, un miembro atípico de la familia de las calpaínas, proteasas de cisteína dependientes de calcio implicadas en la proteólisis regulada que modula el recambio de proteínas y las salidas de señalización. La actividad de las calpaínas puede influir en la remodelación del citoesqueleto, el tráfico vesicular y las vías de respuesta al estrés mediante el corte limitado de sustratos, en lugar de una degradación masiva, ajustando así la homeostasis celular. La expresión de **CAPN15** se ha estudiado en el contexto del desarrollo tisular y la regulación del estado celular, donde una señalización proteolítica alterada puede afectar programas de diferenciación y la función neuronal o epitelial. En la literatura, la proteólisis desregulada relacionada con calpaínas se ha vinculado a mecanismos pertinentes para la neurodegeneración, la inflamación y la señalización asociada al cáncer, lo que respalda a **CAPN15** como diana para el mapeo de vías y la genómica funcional.

Calpain 15 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CAPN15 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Calpain 15 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CAPN15 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CAPN15, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Calpain 15. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CAPN15 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Calpain 15 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Calpain 15 en células tumorales con expresión de CAPN15 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.