Plasmide CRISPR d'Activation (h) CALML3: sc-400954-ACT

CALML3 humain (calmodulin-like 3) code une protéine à motif EF-hand capable de lier le calcium, qui agit comme capteur de Ca2+ et modulateur des voies de signalisation dépendantes du calcium, en influençant les interactions protéine–protéine ainsi que la régulation en aval des kinases et du cytosquelette. L’expression de CALML3 est enrichie dans les contextes épithéliaux et a été associée à des programmes de différenciation, à l’organisation des jonctions cellulaires et à des processus de remodelage régulés par le calcium. Par son intégration aux réseaux plus larges de signalisation du Ca2+, CALML3 peut affecter les réponses transcriptionnelles et l’adaptation au stress cellulaire. Une signalisation calcique dérégulée et des profils d’expression de CALML3 modifiés ont été rapportés dans des études portant sur la transformation épithéliale et la biologie tumorale, ce qui soutient son intérêt comme cible de recherche lors de transitions d’état cellulaire pertinentes pour la maladie.

CALML3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CALML3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CALML3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CALML3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CALML3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CALML3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CALML3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CALML3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CALML3 dans les cellules tumorales présentant une expression de CALML3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.