Plasmide CRISPR d'Activation (h) Calgranulin B: sc-400801-ACT

S100A9 code la calgranuline B, une protéine de la famille S100 se liant au calcium, qui forme un hétérodimère avec S100A8 (calprotectine) et agit comme un motif moléculaire associé aux dommages (DAMP) dans l’immunité innée. La calgranuline B est abondante dans les neutrophiles et les monocytes inflammatoires, régule l’adhésion et la migration des leucocytes, et amplifie la production de cytokines et de chimiokines via des récepteurs tels que TLR4 et RAGE. Son activité est liée aux voies de signalisation NF-κB et MAPK, aux réponses au stress oxydant et au remodelage du microenvironnement inflammatoire myéloïde. La dérégulation de l’expression de S100A9 est fréquemment étudiée dans les maladies inflammatoires chroniques, la biologie myéloïde associée aux tumeurs et l’immunopathologie liée aux infections, à la fois comme marqueur et comme médiateur de l’activation inflammatoire.

Calgranulin B Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de S100A9 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Calgranulin B Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus S100A9 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription S100A9, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Calgranulin B. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus S100A9 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Calgranulin B au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Calgranulin B dans les cellules tumorales présentant une expression de S100A9 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.