Plasmide CRISPR d'Activation (h) Calgranulin A: sc-400610-ACT

S100A8 code la calgranuline A, une protéine de la famille S100 se liant au calcium, qui forme couramment l’hétérodimère S100A8/S100A9 (calprotectine) dans les cellules myéloïdes. La calgranuline A participe à la signalisation de l’immunité innée et à l’amplification de l’inflammation via des interactions avec des récepteurs de reconnaissance des motifs (PRR) tels que TLR4 et RAGE, influençant la chimiotaxie, l’adhésion des leucocytes et la production de cytokines. Elle est étroitement associée aux programmes d’activation des neutrophiles et des monocytes et est fréquemment utilisée comme marqueur d’états myéloïdes inflammatoires. Une expression dérégulée de S100A8 a été associée à des maladies inflammatoires chroniques, à l’inflammation associée aux tumeurs et au remodelage du microenvironnement piloté par les cellules myéloïdes, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques axées sur les voies de signalisation.

Calgranulin A Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de S100A8 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Calgranulin A Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus S100A8 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription S100A8, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Calgranulin A. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus S100A8 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Calgranulin A au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Calgranulin A dans les cellules tumorales présentant une expression de S100A8 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.