Plasmide CRISPR d'Activation (h) Calgizzarin: sc-404169-ACT

S100A11 code la calgizzarine, une protéine de la famille S100 liant le calcium, qui s’associe aux phospholipides et à des éléments du cytosquelette afin de réguler la dynamique membranaire, la motilité cellulaire et la signalisation d’adaptation au stress. La calgizzarine participe à des processus dépendants du Ca2+, notamment le remodelage de l’actine, le trafic vésiculaire et la coordination de la progression du cycle cellulaire, et elle est fréquemment étudiée dans le contexte de la plasticité épithéliale et des microenvironnements inflammatoires. Une expression altérée de S100A11 a été associée à une prolifération dérégulée, à des phénotypes liés à l’invasion et à une résistance à l’apoptose dans de multiples modèles de cancer et de fibrose. En tant que capteur de calcium jouant un rôle de carrefour, la calgizzarine offre un point d’entrée mécanistique pour étudier comment la signalisation calcique s’intègre à l’organisation du cytosquelette et aux programmes transcriptionnels.

Calgizzarin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de S100A11 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Calgizzarin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus S100A11 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription S100A11, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Calgizzarin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus S100A11 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Calgizzarin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Calgizzarin dans les cellules tumorales présentant une expression de S100A11 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.