Plasmide CRISPR d'Activation (h) CAF-1 p60: sc-405091-ACT

CHAF1B code la sous-unité p60 du facteur d’assemblage de la chromatine 1 (CAF-1), un chaperon d’histones qui dépose H3–H4 sur l’ADN nouvellement synthétisé lors de l’assemblage des nucléosomes couplé à la réplication. Grâce à sa coordination avec PCNA aux fourches de réplication et lors de la réparation par excision de nucléotides, CAF-1 favorise le rétablissement de la chromatine, l’héritage épigénétique et la stabilité du génome après la synthèse de l’ADN et en réponse aux dommages. Une perturbation de la maturation de la chromatine régulée par CHAF1B peut modifier les réponses au stress réplicatif, la fidélité de la réparation de l’ADN et les programmes transcriptionnels liés à la prolifération et à la différenciation. Une activité aberrante de CAF-1 a été associée à une dérégulation du contrôle du cycle cellulaire et des voies de maintenance du génome pertinentes en biologie du cancer, ainsi qu’à d’autres troubles caractérisés par une instabilité de la chromatine.

CAF-1 p60 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CHAF1B sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CAF-1 p60 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CHAF1B dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CHAF1B, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CAF-1 p60. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CHAF1B natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CAF-1 p60 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CAF-1 p60 dans les cellules tumorales présentant une expression de CHAF1B silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.