Plásmido CRISPR de Activación (h) cadherin-20: sc-401925-ACT

PCDHGB4 codifica la cadherina-20, un miembro de la familia de las protocadherinas implicado en la adhesión célula–célula dependiente de calcio y en la organización de complejos de reconocimiento en la superficie celular. Las protocadherinas contribuyen al patrón tisular y al mantenimiento de la arquitectura celular al modular la estabilidad de las uniones y la señalización dependiente del contacto, con efectos posteriores sobre la dinámica del citoesqueleto y los programas de expresión génica. La expresión alterada de cadherinas y protocadherinas se ha asociado con una adhesión, migración y estados de diferenciación desregulados, relevantes para trastornos del desarrollo y procesos oncogénicos. Como parte de la red más amplia de cadherinas, la cadherina-20 suele estudiarse en el contexto de la señalización mediada por adhesión y la regulación transcripcional específica de linaje.

cadherin-20 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PCDHGB4 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

cadherin-20 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PCDHGB4 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PCDHGB4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de cadherin-20. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PCDHGB4 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de cadherin-20 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía cadherin-20 en células tumorales con expresión de PCDHGB4 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.