Plasmide CRISPR d'Activation (h) cadherin-19: sc-401716-ACT

Le gène humain **CDH19** code la **cadhérine-19**, une molécule d’adhésion cellulaire **calcio-dépendante** impliquée dans l’adhésion cellule–cellule, qui contribue à l’architecture tissulaire et à une signalisation cellulaire coordonnée dans le système nerveux. En tant que membre de la famille des **cadhérines classiques**, la cadhérine-19 participe à l’assemblage des **jonctions d’adhérence** via des interactions **homophiliques** et un couplage fonctionnel aux **caténines** et au cytosquelette d’**actine**, influençant des voies dépendantes de l’adhésion qui régulent la polarité, la migration et la différenciation cellulaires. L’expression de **CDH19** a été associée à des programmes développementaux et à la spécification de lignées cellulaires, ce qui en fait une cible pertinente pour étudier les mécanismes qui modifient la connectivité cellulaire et les transitions d’état dans des tissus complexes. Une adhésion médiée par les cadhérines dérégulée est fréquemment impliquée dans des modifications du comportement cellulaire associées aux maladies, notamment une différenciation aberrante et des phénotypes invasifs, ce qui motive des recherches centrées sur **CDH19** en neurobiologie et dans des modèles liés au cancer.

cadherin-19 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CDH19 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

cadherin-19 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CDH19 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CDH19, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de cadherin-19. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CDH19 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de cadherin-19 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie cadherin-19 dans les cellules tumorales présentant une expression de CDH19 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.