Cacna2d2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-425312
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Cacna2d2 Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im Cacna2d2-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Cacna2d2: sc-365911
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Cacna2d2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) | sc-425312 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
Cacna2d2 kodiert die α2δ-2‑Hilfsuntereinheit spannungsabhängiger Calciumkanäle, einen zentralen Regulator des Kanal-Targetings, der Membranexpression und biophysikalischer Eigenschaften, die den Calciumeinstrom während neuronaler Erregbarkeit und synaptischer Transmission prägen. Durch die Modulation der CaV‑Kanalfunktion beeinflusst CACNA2D2 aktivitätsabhängige Signalwege, die Neurotransmitterfreisetzung sowie calciumabhängige Genexpressionsprogramme, die die Entwicklung und Plastizität neuronaler Schaltkreise mitbestimmen. Genetische und funktionelle Veränderungen von α2δ‑Untereinheiten wurden mit neurodevelopmentalen und neurologischen Phänotypen in Verbindung gebracht, wobei Cacna2d2 insbesondere mit Kleinhirnfunktion und motorischen Koordinationsbahnen assoziiert ist. Diese Eigenschaften machen Cacna2d2 zu einem nützlichen Ziel, um akzessorische Mechanismen von Calciumkanälen in der Neurobiologie und in elektrophysiologisch ausgerichteten Krankheitsmodellen zu untersuchen.
Das Cacna2d2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Cacna2d2-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Cacna2d2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Cacna2d2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Cacna2d2-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Cacna2d2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Cacna2d2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf Cacna2d2-Exone abzielen, die für die Cacna2d2-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere Cacna2d2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom Cacna2d2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Cacna2d2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Cacna2d2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Cacna2d2 HDR-Plasmid (m) und Cacna2d2 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Cacna2d2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Cacna2d2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.