Plásmido Doble Nickase (h) CA III: sc-403538-NIC

El gen humano **CA3** codifica la anhidrasa carbónica III (CA III), una metaloenzima citosólica de zinc que cataliza la hidratación reversible del CO₂ a bicarbonato y protones, contribuyendo al control del pH intracelular y al sistema tampón CO₂/HCO₃⁻. La CA III se expresa en niveles altos en el músculo esquelético oxidativo y contribuye a la homeostasis redox mediante residuos de cisteína reactivos que pueden S-glutationilarse, lo que la vincula a las respuestas celulares frente al estrés oxidativo. Al modular el equilibrio ácido–base y procesos sensibles al estado redox, la CA III se relaciona con la regulación metabólica y con vías de adaptación al estrés relevantes para la fisiología muscular. Se han descrito alteraciones en la expresión de **CA3** y en la actividad de la CA III en contextos de disfunción muscular y estados de estrés metabólico, lo que la convierte en un marcador útil y en un nodo mecanístico para estudiar el metabolismo celular y el daño oxidativo.

CA III El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CA3 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CA3. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CA3. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CA3 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.