Plasmide CRISPR d'Activation (h) CA II: sc-401059-ACT

Le gène humain **CA2** code l’anhydrase carbonique II (CA II), une métalloenzyme cytosolique très active qui catalyse l’hydratation réversible du CO₂ en bicarbonate et protons, contribuant ainsi au contrôle du pH intracellulaire et au transport du couple CO₂/bicarbonate. En s’associant à des transporteurs de bicarbonate et à des échangeurs d’ions, la CA II participe à l’homéostasie acido-basique, aux mouvements ioniques épithéliaux et au tamponnement du pH métabolique dans de nombreux tissus. Une activité anormale des anhydrases carboniques a été associée à des modifications de l’acidification cellulaire et de l’adaptation métabolique, fréquemment étudiées dans des contextes tels que la fonction tubulaire rénale et le pH du microenvironnement tumoral. **CA2** constitue donc une cible utile pour explorer la signalisation dépendante du CO₂/HCO₃⁻, l’homéostasie ionique et les réseaux enzymatiques sensibles au pH.

CA II Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CA2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CA II Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CA2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CA2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CA II. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CA2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CA II au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CA II dans les cellules tumorales présentant une expression de CA2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.