Plasmide Double Nickase (h) CA I: sc-404963-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) CA I correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide CA I Double Nickase (h) et le plasmide CA I Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant CA1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: CA I Antibody (F-5): sc-393490
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) CA I | sc-404963-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) CA I | sc-404963-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène humain **CA1** code l’anhydrase carbonique I (CA I), une métalloenzyme au zinc qui catalyse l’hydratation réversible du CO₂ en bicarbonate et protons, contribuant au contrôle du pH intracellulaire, au transport du CO₂ et au tamponnage dépendant du bicarbonate. L’activité de CA I participe à l’homéostasie acido-basique et s’articule avec des processus de transport ionique qui coordonnent l’échange chlorure/bicarbonate ainsi que la gestion des gaz par les érythrocytes. Une altération de la fonction des anhydrases carboniques peut perturber la régulation du pH cellulaire et le métabolisme d’adaptation au statut rédox, des caractéristiques fréquemment étudiées dans des contextes tels que la physiologie hématologique, l’équilibre rénal et gastro-intestinal du bicarbonate, et l’acidification du microenvironnement tumoral. **CA1** est donc souvent utilisé comme marqueur et nœud fonctionnel dans des études portant sur la signalisation dépendante du pH, l’adaptation métabolique et les flux de dioxyde de carbone/bicarbonate.
CA I Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CA1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CA1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CA1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CA1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.