Plasmide CRISPR/Cas9 KO C8β (h): sc-408409

Présentation

C8B code la chaîne bêta du composant C8 du complément (C8β), une sous-unité essentielle de l’hétérotrimère C8 (C8α, C8β, C8γ) qui participe à l’activation terminale du complément. Au sein des cascades du complément classique, des lectines et alternative, C8β contribue à stabiliser l’assemblage du complexe d’attaque membranaire (MAC ; C5b-9) sur les membranes cibles, favorisant la formation de pores et la fonction effectrice lytique. Cette activité contribue à la défense immunitaire innée, à la signalisation inflammatoire et aux interactions avec les processus liés à l’opsonisation et à la coagulation. Une altération de la fonction terminale du complément, y compris une dérégulation du MAC, est associée à une susceptibilité accrue aux infections et à des lésions tissulaires médiées par le système immunitaire, ce qui fait de C8B une cible pertinente pour la recherche en immunologie et en inflammation.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO C8β (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène C8B dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du C8B, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert C8B à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine C8β.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en C8B pour l'étude de la signalisation de C8β, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de C8B essentiels à la fonction de C8β
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de C8B pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le C8β plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le C8β plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus C8B. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le C8β plasmide HDR (h) et le C8β (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie C8B pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles C8B définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.