Plasmide CRISPR/Cas9 KO C4a (h): sc-402428

Présentation

Le composant du complément 4A (C4A) code le fragment C4a généré lors de l’activation protéolytique du complément C4, une étape centrale des voies du complément classique et des lectines. Le clivage de C4 favorise la formation de la convertase C3 et stimule en aval l’opsonisation, la signalisation inflammatoire et l’élimination des complexes immuns. Des variations du nombre de copies et de l’expression de C4A ont été associées à une dysrégulation immunitaire et à une activité du complément altérée, avec des implications pour l’auto-immunité et des phénotypes liés à la neuroinflammation. En tant qu’indicateur de l’activation du complément, C4a est couramment utilisé pour étudier les interactions entre l’immunité innée et les réponses adaptatives, ainsi que les mécanismes de lésions tissulaires.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO C4a (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène C4A dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du C4A, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert C4A à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine C4a.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en C4A pour l'étude de la signalisation de C4a, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de C4A essentiels à la fonction de C4a
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de C4A pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le C4a plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le C4a plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus C4A. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le C4a plasmide HDR (h) et le C4a (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie C4A pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles C4A définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.