Plásmido Doble Nickase (h) C3G: sc-401616-NIC

RAPGEF1 codifica C3G, un factor de intercambio de nucleótidos de guanina que activa Rap1 y otras pequeñas GTPasas relacionadas para coordinar la adhesión dependiente de integrinas, la remodelación del citoesqueleto y la migración celular. Mediante el reclutamiento mediado por adaptadores aguas abajo de receptores tirosina cinasa y receptores inmunitarios, C3G ayuda a acoplar señales extracelulares a las vías de MAPK y Rap1, que influyen en la proliferación, la diferenciación y el tráfico vesicular. En contextos hematopoyéticos y epiteliales, la alteración de RAPGEF1 se ha vinculado con cambios en la dinámica de las uniones célula–célula y con redes de señalización desreguladas relevantes para la transformación oncogénica y la función de las células inmunitarias. Como nodo de la vía que conecta la fosforilación de tirosina con respuestas impulsadas por Rap, C3G se estudia con frecuencia en modelos de invasión, activación de leucocitos y plasticidad de la señalización dependiente de receptores.

C3G El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus RAPGEF1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de RAPGEF1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de RAPGEF1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con RAPGEF1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.