Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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C3G Double Nickase Plasmid (h): sc-401616-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das C3G Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- C3G Double-Nickase-Plasmid (h) und C3G Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf RAPGEF1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: C3G: sc-17840
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
C3G Double Nickase Plasmid (h) | sc-401616-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
C3G Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401616-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
RAPGEF1 kodiert C3G, einen Guanin-Nukleotid-Austauschfaktor, der Rap1 und verwandte kleine GTPasen aktiviert, um integrinabhängige Adhäsion, Zytoskelett-Remodellierung und Zellmigration zu koordinieren. Durch adaptorvermittelte Rekrutierung downstream von Rezeptor-Tyrosinkinasen und Immunrezeptoren trägt C3G dazu bei, extrazelluläre Signale mit MAPK- und Rap1-Signalwegen zu koppeln, die Proliferation, Differenzierung und vesikulären Transport beeinflussen. In hämatopoetischen und epithelialen Kontexten wurde eine Störung von RAPGEF1 mit veränderter Dynamik von Zell-Zell-Kontakten und fehlregulierten Signalnetzwerken in Verbindung gebracht, die für onkogene Transformation und die Funktion von Immunzellen relevant sind. Als Knotenpunkt, der Tyrosinphosphorylierung mit Rap-vermittelten Antworten verknüpft, wird C3G häufig in Modellen zu Invasion, Leukozytenaktivierung und rezeptorgetriebener Signalplastizität untersucht.
C3G Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des RAPGEF1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von RAPGEF1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die RAPGEF1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit RAPGEF1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.