Plasmide Double Nickase (h) C20orf54: sc-405094-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) C20orf54 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide C20orf54 Double Nickase (h) et le plasmide C20orf54 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant SLC52A3. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) C20orf54 | sc-405094-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) C20orf54 | sc-405094-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SLC52A3, également connu sous le nom de C20orf54, code un transporteur de riboflavine à haute affinité qui assure l’entrée cellulaire de la vitamine B2, précurseur du FMN et du FAD nécessaires aux réactions d’oxydo-réduction dépendantes des flavoprotéines. En maintenant la disponibilité des cofacteurs flaviniques, C20orf54 soutient le métabolisme oxydatif mitochondrial, la β‑oxydation des acides gras et, plus largement, l’homéostasie redox cellulaire. Une altération de l’activité de SLC52A3 a été associée à des phénotypes de déficit en transporteur de riboflavine ainsi qu’à des dysfonctionnements neurodéveloppementaux et neuromusculaires liés à l’atteinte de voies dépendantes des flavines. En biologie du cancer, l’expression de SLC52A3 a été étudiée comme un déterminant métabolique influençant l’approvisionnement en cofacteurs et les réponses au stress oxydant.
C20orf54 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus SLC52A3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de SLC52A3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de SLC52A3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de SLC52A3.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.