Plasmide CRISPR d'Activation (m) C1qL2: sc-432618-ACT

C1ql2 code pour C1qL2, une protéine sécrétée de la superfamille C1q/TNF, enrichie dans le système nerveux et impliquée dans l’organisation des synapses et la communication neuronale. C1qL2 peut agir comme organisateur synaptique en activant une signalisation médiée par des récepteurs, qui influence la connectivité des circuits excitateurs, l’arborisation des neurites et la plasticité dépendante de l’activité. Par son rôle dans la signalisation extracellulaire au niveau des synapses, C1ql2 est étudié dans des voies associées au neurodéveloppement et au remodelage des réseaux, avec un intérêt pour les mécanismes à l’origine de phénotypes cognitifs et neuropsychiatriques. Dans des modèles murins, la modulation de l’expression de C1ql2 permet d’examiner comment des protéines de type complément participent au maintien des synapses et au fonctionnement des circuits.

C1qL2 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de C1ql2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

C1qL2 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus C1ql2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription C1ql2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de C1qL2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus C1ql2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de C1qL2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie C1qL2 dans les cellules tumorales présentant une expression de C1ql2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.