Plasmide CRISPR/Cas9 KO C1q-C (m): sc-419388

Présentation

C1qc code la chaîne C du composant du complément C1q, une molécule de reconnaissance qui initie la voie classique du complément par association avec C1r et C1s et par liaison aux complexes immuns, aux cellules apoptotiques et au soi altéré. Chez la souris, C1q contribue à la surveillance immunitaire innée en favorisant l’opsonisation, l’élimination phagocytaire et la modulation de la signalisation inflammatoire, avec des effets en aval sur l’activation de la cascade du complément et les réseaux de cytokines. Les processus dépendants de C1q‑C sont fréquemment étudiés en biologie des macrophages et de la microglie, notamment dans le remodelage des synapses et l’homéostasie tissulaire, où le marquage médié par le complément peut influencer l’élagage cellulaire et les mécanismes d’élimination. Une activité de C1q dérégulée et l’activation du complément sont associées à des phénotypes inflammatoires et neuro‑immuns pertinents pour des modèles de recherche sur l’auto-immunité, les réponses aux infections et la neurodégénérescence.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO C1q-C (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène C1qc dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du C1qc, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert C1qc à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine C1q-C.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en C1qc pour l'étude de la signalisation de C1q-C, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de C1qc essentiels à la fonction de C1q-C
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de C1qc pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le C1q-C plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le C1q-C plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus C1qc. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le C1q-C plasmide HDR (m) et le C1q-C (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie C1qc pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles C1qc définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.