Plasmide CRISPR d'Activation (h) C1q-B: sc-404309-ACT

C1QB code la chaîne B du composant du complément C1q, une sous-unité de reconnaissance de la voie classique du complément qui se lie aux complexes immuns et aux structures du soi altérées afin d’initier l’activation du complément. C1q contribue à l’opsonisation, à l’élimination par phagocytose et à la modulation de la signalisation inflammatoire, reliant l’immunité innée à l’homéostasie tissulaire. Dans les cellules myéloïdes et les macrophages résidents des tissus, les processus associés à C1q s’entrecroisent avec les réseaux de cytokines, l’élimination des débris synaptiques et apoptotiques, ainsi que les interactions avec la matrice extracellulaire. Une expression dérégulée de C1q/C1QB a été associée à des phénotypes inflammatoires et auto-immuns et a été étudiée dans des contextes tels que la neuroinflammation, l’infection et le remodelage immunitaire associé aux tumeurs.

C1q-B Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de C1QB sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

C1q-B Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus C1QB dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription C1QB, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de C1q-B. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus C1QB natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de C1q-B au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie C1q-B dans les cellules tumorales présentant une expression de C1QB silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.