Plasmide CRISPR d'Activation (h) C1GALT1: sc-403509-ACT

C1GALT1 code la β1,3-galactosyltransférase 1 du core 1, une enzyme clé localisée dans l’appareil de Golgi, indispensable à l’allongement des O‑glycanes de type mucine en convertissant l’antigène Tn (GalNAc‑Ser/Thr) en structure core 1 (antigène T). Par cette activité, C1GALT1 façonne la composition des glycoprotéines de surface et sécrétées, influençant la liaison aux lectines, l’organisation des récepteurs et la résistance aux protéases dans des contextes épithéliaux et hématopoïétiques. Une altération de la fonction de C1GALT1 perturbe des processus dépendants de l’O‑glycosylation, notamment l’adhésion cellulaire, la migration et la reconnaissance immunitaire, et est associée au remodelage des glycannes observé dans l’inflammation et dans des phénotypes liés au cancer. En tant que nœud central des voies d’O‑glycosylation, C1GALT1 est fréquemment étudié en lien avec la biologie des mucines, la fonction barrière et les modifications glycoprotéomiques qui modulent les microenvironnements de signalisation.

C1GALT1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de C1GALT1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

C1GALT1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus C1GALT1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription C1GALT1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de C1GALT1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus C1GALT1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de C1GALT1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie C1GALT1 dans les cellules tumorales présentant une expression de C1GALT1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.