C12orf57 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-408545-ACT

C12orf57 kodiert ein kleines, bislang nur unzureichend charakterisiertes menschliches Protein, das mit grundlegenden Prozessen der zellulären Homöostase in Verbindung gebracht wird; zunehmende Hinweise deuten zudem auf Funktionen in der neuronalen Entwicklung und in stressresponsiven Prozessen hin. Obwohl seine molekularen Interaktionspartner und die Einordnung in Signalwege weiterhin Gegenstand aktiver Forschung sind, wurde eine veränderte C12orf57-Gen-Dosis mit neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen und syndromalen Krankheitsbildern assoziiert, was die Notwendigkeit einer präzisen Genregulation in differenzierten Geweben unterstreicht. Die transkriptionelle Kontrolle von C12orf57 könnte mit übergeordneten Programmen zusammenwirken, die Zellschicksalsentscheidungen, Proteostase und die Dynamik intrazellulärer Signalübertragung steuern. Diese Eigenschaften machen C12orf57 zu einem nützlichen Genlokus, um zu untersuchen, wie subtile Expressionsänderungen zelluläre Phänotypen beeinflussen, die für die neurobiologische und entwicklungsbiologische Forschung relevant sind.

C12orf57 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen C12orf57-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

C12orf57 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des C12orf57-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der C12orf57-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen C12orf57-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native C12orf57-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von C12orf57-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des C12orf57-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem C12orf57-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.